產品名稱：HiFi HotStart ReadyMix PCR Kit

產品貨號：KK2601/KK2602         產品規格：100 Rxns/500 Rxns

KAPA HiFi高保真酶是二代基因工程酶，分熱啟動版和非熱啟動版，保真性強，活力超高。具有以下特點：

1）超高保真，通過大規模二代測序得出的出錯率：2.8×10^-7

2）可以擴增各種復雜模板；

3）擴增片段長，擴增基因組可達15kb，質粒DNA或噬菌體DNA可達18kb；

4）擴增速度快，節省75%以上的時間；

5）KAPA高保真熱啟動酶，含有2中buffer，分別用于常規模板和高難度模板。

產品描述KAPA HiFi點燃了DNA聚合體是b家族的DNA聚合酶，被設計來增加對DNA的親和力。不需要輔助蛋白或DNA結合結構域。與野生型b族DNA聚合酶相比，該酶內在的高加工性導致在產量、速度和敏感性方面的顯著提高。此外，擴增長片段以及富GC-和at目標的能力也得到了顯著提高。該酶與一種專有抗體結合，在*步變性之前使酶失活。這可以防止在反應設置期間的非特異性放大，增加靈敏度，并提高反應效率。在ReadyMix PCR試劑盒中，KAPA HiFi熱啟動DNA聚合酶以方便的2X ReadyMix格式提供，包含除引物和模板外的所有反應組分。預混合物包含KAPA HiFi熱啟動DNA聚合酶(每25 uL反應0.5 U)，在專用反應緩沖液中包含dNTPs(每dNTP在1倍濃度下0.3 mM)、MgCl(在1倍濃度下2.5 mM)和穩定劑。KAPA HiFi熱啟動ReadyMix是專為常規，高保真PCR，廣泛的目標和片段大小。它提供的錯誤率大約比野生型標簽DNA聚合酶低100倍，成功率和產量比野生型b族(校對)DNA聚合酶更高。此外，與野生型b族DNA聚合酶相比，KAPA HiFi熱啟動需要更短的循環時間。

1、產品表現

1）超級保真、靈敏

2）擴增復雜模板————無可匹敵

3）退火溫度對條帶特異性的重要性

2、PCR反應

1）推薦反應體系

2）推薦反應參數

3、應用

1）基因定點突變；2）測序；3）蛋白表

注意事項：

1）HiFi Buffer中鹽離子濃度較高，影響DNA變性/退火，所以復雜模板需要較長的變性溫度，5分鐘；GC Buffer主要針對高GC或穩定二級結構的模板，僅當HiFi Buffer效果不佳時使用，但其會降低保真性；

2）每個循環中變性條件為：98℃20s；

3）退火溫度需通過梯度PCR優化得到；根據Tm值設定的退火溫度，然后若要增加靈敏度可每次提高1℃，若要提高特異性每次降低1℃；

4）推薦延伸時間：30s/kb；若模板濃度高，可降低延伸時間，但較長的延伸時間會增加實驗的靈敏度和產量；

5）推薦25個或更少的循環數，若起始模板濃度低或擴增效率偏低導致產量不高，可增加至30-35個循環；

6）該體系可擴增≥10kb的目的基因片段。若實驗對MgCl2有特殊要求，請進行梯度試驗，每次增加或減少0.25mM；

7）根據實驗要求可調整HiFi酶的濃度，范圍：0.25U-1.0U/25μl；

8）末端加A，HiFi高保真酶擴增產物是平末端，若要連接到T載體上，擴增產物純化后用KAPA Taq DNA酶進行72℃延伸，因為未純化的產物中含有HiFi酶，其校對活性影響加A效果。

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