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【買試劑，找華雅】BD CBA流式液相多重蛋白定量技術
雖然液相蛋白定量檢測的技術很多，但是大多數的技術僅能對樣本進行單一指標的檢測，同時檢測多個指標時則需要提供大量的樣本分批檢測，操作繁瑣，且各指標間差異性較大。對于樣本量較少或需要對比各指標的用戶，傳統的技術無法滿足需要。日常實驗中，常需對溶液體系中的可溶性蛋白進行定量檢測，如細胞培養上清或血清中的細胞因子含量的定量分析，由于這些因子的含量較少，低于一般常規方法的檢測下限，使用常規的蛋白檢測方法Western Blot等很難檢測。為此，的流式抗體公司BD-Pharmingen開發了基于流式細胞儀的液相蛋白定量技術——CBA。
CBA工作原理
Cytometric Bead Array（CBA）,即細胞因子微球檢測技術.是一種基于流式細胞檢測系統的多重蛋白定量檢測方法，它能夠同時對單個樣品中的多個指標進行檢測。BD公司利用流式細胞儀可對熒光信號進行級數放大的特性，將受檢的可溶性因子附著于一些具有近似細胞直徑的微粒上，即可對受檢樣品中的各種可溶性因子進行檢測。
CBA的基本原理近似于ELISA的檢測，即利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，并利用流式細胞儀檢測類似“三明治”的顆?！郎y物復合體所散發的熒光，從而測定待測物的數量。（如圖1）
(圖1)
詳細原理介紹
每個CBA微球大小一致，具有特定的熒光強度，包被有適用于特定分析（如其它抗體或者可溶性蛋白）的特異性捕獲抗體（Capture Antibody），提供了類似ELISA孔板的捕獲表面。
當微球和待測樣品溶液混合后，微球上的特異性抗體就與樣品（血清、血漿或者細胞培養液）中相應的抗原或蛋白結合，然后加入熒光標記的檢測抗體，就會形成“三明治”夾心復合物。（如圖2）
zui后通過流式細胞儀對特異性目的蛋白進行檢測。CBA的每種微球攜帶有不同強度的紅色熒光，在流式細胞儀的FL3通道通過檢測微球熒光強度的差異對目的蛋白定性；檢測抗體帶有PE熒光素標記，在流式細胞儀的FL2通道檢測，通過檢測抗體的PE熒光強度定量目的蛋白。
(圖2)
CBA技術特點
CBA是集ELISA和細胞流式技術優點為一身的液相蛋白檢測技術。CBA的每一種微球提供一種蛋白的捕獲表面，捕獲微球與待測樣品后，呈懸浮態，與ELISA相比，能更有效地捕獲被分析物；CBA具有FCM的寬范圍熒光檢測特點，對樣本需求量更少，檢測更快速、更準確。下面我們介紹一下CBA主要的技術特點:
1 輕松實現多重檢測
zui多可同時對一個樣本中的75個目的蛋白進行定量。
2 樣本需要量小
僅需要50μL溶液就可進行一次檢測。
3 更高的靈敏度、更寬的檢測范圍和更好的重復性
分析靈敏度高達2.8pg/mL。
4 更高的靈敏度、更寬的檢測范圍和更好的重復性
CBA技術使蛋白定量的分析靈敏度高達pg/ml級別,檢測范圍達0-5000pg/ml，所有分析只需一組標準曲線。根據抗體的熒光強度對目的蛋白定量，排除了ELISA反應中酶聯放大產生的假陽性。
5 檢測對象的靈活組合—BD CBA Flex Set
CBA kit是同時檢測試劑盒配好的6個指標，形式比較固定。為滿足不同客戶的實際需要和研究興趣，BD于2005年初推出了CBA Flex set。它改變了CBAkit的固定形式，成為自由組合、靈活搭配的“自助餐”。您可以根據需要組合不同的捕獲微球來檢測多個指標，zui多能同時檢測75個指標。
除了擁有CBA kit的優勢外，Flex Set還配有獨立的軟件分析系統（CBA Flex Set Analysis Software），并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上，直接用96孔和384孔板進行操作。
CBA Flex set賦予研究者更靈活、更自由，更大的選擇空間，而且進一步豐富了CBA產品線。種類涉及免疫、細胞信號傳導、細胞凋亡等許多領域的蛋白定量分析。
6 操作簡單，省時省力
CBA技術采用芯片式集成測定，所有檢測只需一組標準曲線，就可計算出每種待測蛋白濃度；操作簡單，整個流程只需要3.5小時，對待測樣本可做實時分析，縮短檢測了時間，提高了檢測效率。
7 強大的軟件分析系統
BD CBA軟件具有強大的數據處理能力，直接將目標蛋白的檢測結果換算成標準濃度；除了為用戶提供待測物的計數結果外，還能提供可視輪廓或信號圖形以幫助用戶獲得更多的信息。有用于Macintosh和Microsoft系統兩種版本供您選擇。
和傳統的液相蛋白定量技術相比，CBA技術是一種“多元”和“同步”的檢測技術。 革新的CBA技術與傳統的蛋白定量相比有下列優點：（表1）
| 傳統ELISA | BD CBA |
| 單項檢測 | 多參數檢測 |
| 每項實驗樣本用量50-200ul | 樣本用量少于50ul |
| 需要抗原包被 | 操作方便，節省時間 |
| 實驗時間大于24h | 流式細胞儀自動檢測，標準曲線自動測定，軟件自動計算 |
| 酶-底物背景干擾 | 無酶-底物背景干擾 |
產品應用
自CBA上市以來，越來越多的科研和臨床研究人員將CBA應用于他們的領域。CBA應用領域涉及眼淚、血清、唾液、細胞培養上清等樣本中細胞因子、炎癥因子的水平的分析。CBA還用于細胞信號傳導中磷酸化蛋白、凋亡相關蛋白分析，系統性紅斑狼瘡（SLE）和新生兒膿血癥等免疫疾病的監控，腫瘤研究，藥物對病人的治療效果評估，藥物研發，疫苗研究，總體免疫功能分析等多領域。
CBA產品信息見下表:
1 CBA Kit現貨供應
| Cat.# | 產品描述 | 試劑盒檢測指標 |
| 557800 | Non-human Primate Th1/Th2 Cytokine Kit | IL-2, IL-4, IL-5, IL-6,TNF, IFN-γ |
| 560485 | Mouse Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit | IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF, IL-17A, IL-10 |
| 551287 | Mouse Th1/Th2 Cytokine Kit | IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ,TNF |
| 552364 | Mouse Inflammation Kit | IL-6, IL-10, MCP-1, IFN-γ, TNF, IL-12p70 |
| 550026 | Mouse Immunoglobulin Isotyping Kit | Heavy and light chain isotypes of mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, and IgE |
| 560484 | Human Th1/Th2/Th17 Kit | IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-γ, IL-17A |
| 550749 | Human Th1/Th2 Cytokine Kit | IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g |
| 551809 | Human Th1/Th2 Cytokine Kit II | IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g |
| 551811 | Human Inflammatory Cytokine Kit | IL-8, IL-1β, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70 |
| 552990 | Human Chemokine Kit | IL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10 |
| 561418 | Human Anaphylatoxin Kit | C3A,C4A,C |
2 現有CBA Flex Set產品
| Human | Mouse | Rat | |
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IFN-γ,INF-α IL-1 α ,IL-1β, IL-2,IL-3, IL-4 , IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-12p70, IL-13, IL-17A, IL-21, IL- 23p40 TNF,TNFRⅠ,TNFRⅡ IP-10 I-TAC MIG MCP-1 MIP-1 α, MIP-1 β Eotaxin RANTES CD54(ICAM-1) CD62E,CD62P,CD62L CD106(VCAM-1) sCD40 sCD154 |
sCD121a,sCD121b Soluble CD14 Basic FGF VEGF Angiogenin G-CSF,GM-CSF LIF LT-α OSM Granzyme A, Granzyme B Fas Ligand(FasL) Fractalkine IgA, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, Total IgG, |
IFN- γ IL-1 α ,IL-1β, IL-2,IL-3, IL-4 , IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-12, IL-12p70, IL-13, IL-17A, IL-21, IL- 23p40, TNF MIG MCP-1 MIP-1 α, MIP-1 β RANTES KC CD62E(E-Selectin), CD62L(L-Selectin) G-CSF,GM-CSF |
IFN- γ IL-1 α, IL-4 , IL-6, IL-10 TNF |
3 CBA Flex Set產品-信號蛋白
| Phospho Akt1(S473) | Phospho Akt2(S474) |
| Phospho BLNK (Y84) | Phospho p120 Catenin(Y228) |
| Phospho Btk (Y551) | Phospho MEK1/2(S222) |
| Phospho eNOS (S1177) | Phospho Paxillin(Y118) |
| Phospho ERK1/2 (T202/Y204) | Phospho Pyk2(Y402) |
| Phospho Itk (Y511) | Phospho SLP-76(Y145) |
| Phospho JNK1/2 (T183/Y185) | Phospho c-jun(S63) |
| Phospho p38 (T180/Y182) | Phospho stat3 |
| Phospho PLC? (Y783) | |
| Phospho Rsk (T573) | |
| Phospho Stat1 (Y701) | |
| Phospho Syk (Y352) | |
| Phospho ZAP70 (Y319) | Human Rex-1 Flex Set |
| Total Stat1 | Human Oct-4 Flex Set |
| Total Syk | Human Nanog Flex Set |
| Total ZAP70 |
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